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8个关于液相色谱精选问答(二)
发布时间:2021-12-3 16:48:51  文章来源:  浏览次数:213
5.影响出峰时间的因素有哪些?
问题描述:
pH值不同出峰时间不同,具体原理是什么?除了pH值会影响,还有其他因素吗?
解答:
流动相的pH值主要是影响到分配系数而出峰时间的不同。
影响出峰时间的因素有很多,从分配系数、容量因子等各个方面考虑,与目标化合物在固定相和流动相中的分配性质有关,还与流速,压力,柱温等液相色谱仪参数有关,具体涉及下面几种因素的影响:
a.目标化合物本身,具体包括分子量、结构、化合物类型、极性等;
b.流动相,具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性,洗脱方式,流速等;
c.固定相,具体包括固定相种类,结构,色谱柱长度等;
d.分配系数与容量因子,具体包括化合物在流动相与固定相之间的分配情况,柱温等。

6.有没有方法将保留时间提前?
问题描述:
我现在用液相色谱做含量测定时,保留时间太长,20分钟左右才出峰,有没什么方法提前,原理是什么?
解答:
可以从通过改变目标组分容量因子k的方式,以及缩短柱长增加柱温等方式,具体可以采取以下方法:
a.调整流动相,具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性,洗脱方式,提高流速等;
b.调整固定相,具体包括固定相种类,结构,缩短色谱柱长度等;
c.增加柱温,降低流动相传质阻力等。

7.流动相使用前为什么要脱气?
解答:
首先我们了解一下不脱气可能造成的影响:
气泡会增加基线的噪音,造成灵敏度下降,甚至无法分析(噪声增大,基线不稳,突然跳动)。
溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化,柱中固定相(如烷基胺)发生反应,降解而改变柱的分离性能。
溶解氧能与某些溶剂(如甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物,此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下),并导致检测灵敏度的轻微降低,会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。
若用FLD(荧光检测器),溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象,特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下,荧光响应可降低达95%。
脱气的作用:除去其中溶解的气体(如O2),以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低而产生气泡。
排出气泡能减少泵工作的伤害,提高UV检测器的性能高,改善灵敏度。
脱气的方式:加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染,同时需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。
抽真空脱气法:易抽走有机相。
超声脱气法:流动相放在超声波容器中(一般500ml溶液需超声20~30min),此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触,以免玻璃瓶破裂,容器内液面不要高出水面太多。
氦气脱气法:在色谱操作前和进行时,将惰性气体喷入溶剂中。严格来说,此方法不能将溶剂脱气,它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。主要利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效果较好,但成本高。
在线真空脱气法:利用在线脱气机在线脱气,智能控制,无需额外操作,成本低,
脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。

8.怎样提高高效液相色谱法的柱效?
解答:
1.要想提高液相色谱法的柱效,应当用小而均匀的固定相颗粒填充均匀,以减小涡流扩散和流动相传质阻力,这是最佳的提升柱效的方法。
2.改进固定相的结构,可以减小滞留流动相传质阻力以及固定相传质阻力。
3.选用低粘度的流动相(如甲醇、乙腈等),也有利于减小传质阻力,提高柱效。
4.合适的柱温,也会影响到柱效。
5.降低流速、增加柱长也可以提高柱效。