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配制高效液相色谱仪的流动相,需要仔细仔细再仔细!
发布时间:2021-11-18 16:37:10  文章来源:  浏览次数:52

高效液相色谱仪是以高压下的液体为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。现如今,液相色谱法应用非常广泛,像是高沸点不易挥发的、受热不稳定的有机化合物都可以用液相色谱仪来测定,比气相色谱的局限性小很多。流动相就像是一条延绵不断的河流,从储液瓶出发,经过脱气机,混合比例阀再到色谱柱,检测器,最后流到了废液桶。如果它不纯净或被污染的话,那整个液相都会波及到。下面小编就带大家一块来学习一下使用流动相时的注意事项吧。


一、流动相试剂的选择
1.色谱纯。液相色谱仪所用的试剂必须是色谱纯级别的,而且使用之前需要抽滤经过0.45um或者0.22um的微孔滤膜,除去试剂中的细小颗粒和其他杂质,以免溶剂残留的杂质在色谱柱长期累积,降低柱效和寿命。
2.粘度。一般要求流动相的粘度应小于2cp,若使用高粘度溶剂,势必会增高柱压,不利于分离。常用的低粘度溶剂有乙腈、丙酮、乙醇等。
3.溶解性。溶剂对于待测样品,必须具有合适的极性和良好的选择性,符合相似相溶的原则,以免样品沉淀在系统中特别是色谱柱中,日积月累降低柱效。
4.溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器,应注意选用的检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。截止波长是指某一个特定的波长,超过这个波长的紫外线,紫外检测器对其几乎不响应,或者说响应很小。对于示差检测器,要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相,来达到最好的灵敏度。
5.缓冲盐和PH。用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,来抑制样品目标物的解离,增加目标物在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。一般样品溶液是酸性时,会在流动相中加入少量甲酸,醋酸或者磷酸来提高液相的分离度和改善峰形,但一定注意流动相的PH在色谱柱的耐受酸碱度范围内。样品溶液是碱性时则相反。可以根据目标物的pKa来确定pH,根据pH选择缓冲盐的种类,常用的缓冲盐溶液有乙酸铵,磷酸盐,三乙胺等。
二、流动相的储存
1.流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内,不能贮存在塑料容器中。安捷伦和waters液相配套的一般都是玻璃瓶。
2.流动相的存放时间一般不超过24h,现配现用是最安全的,特别是缓冲盐溶液,如乙酸盐等,极容易产生沉淀和滋生微生物长霉。长期积累的微生物会出现肉眼可见的絮状“毛毛”粘附在溶剂滤头上,损坏滤头,然后进入真空腔和比例阀甚至是色谱柱中,最终损坏一连串的仪器配件和耗材。因此缓冲盐的流动相最好是现配现用,抽滤脱气(一般是超声波脱气),不要贮存,使用完后仔细刷洗储液瓶,然后准备下一次的使用。
3.储液瓶一定要盖严,最好用原装配套的盖子,一是防止溶剂,特别是有机溶剂的挥发引起组分变化,导致保留时间的改变,二是防止二氧化碳溶入流动相中,影响流动相的PH值。
总结:流动相的选择和使用看似简单,往往被大家所忽略,但也是出问题最多的地方,许多色谱柱,泵,检测器污染的问题都是因为流动相引入的杂质产生的,希望大家能重视。像抽滤和脱气,缓冲盐的现配现用等等这些看似不起眼的小细节,却是仪器维护保养的最有效手段。一分耕耘,一分收获,日常的按部就班,一点一滴的维护,才能保证仪器的长久耐用!